换一批
换一批周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建
Construction of prokaryotic and eukaryotic expression plasmids with cysteine protease gene from periodic Brugia malayi
摘要目的 构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(BmCP)基因原核和真核表达质粒,为进一步研究奠定基础.方法 从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的 基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒,进行测序分析和同源性比较.阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,用PCR和双酶切鉴定阳性重组子.结果 RT-PCR扩增出1条约1201 bp的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99%.构建了真核重组表达质粒pcDNA3.1-BmCP.结论 成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒,为进一步研究该基因的功能提供了条件.
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分类号
R3
栏目名称
DOI
10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2007.06.015
发布时间
2008-03-03
基金项目
江苏省教育厅自然科学基金（04KJD310136）
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