换一批
换一批小鼠Ras激酶抑制剂(KSR)基因氨基端和羧基端真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
Construction of eukaryotic expression vectors of carboxyl terminus and amino terminus of kinase suppressor of Ras (KSR) and their expression in 293T cell line
摘要背景与目的已有的实验证据表明,Ras激酶抑制剂(kinase suppressor of Ras,KSR)的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体.但KSR是否存在激酶活性,一直是争论的焦点.本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端(N-KSR)和羧基端(C-KSR)的真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达.方法通过PCR方法扩增N-KSR和C-KSR目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定.鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,通过Western blot方法检测目的蛋白的表达.结果通过酶切和测序鉴定,pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体序列正确,编码框正确.转染后的293T细胞经Western blot检测,能够表达目的蛋白.结论成功构建了pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体并可在293T细胞中表达,为以后的研究奠定了基础.
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