制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达

Preparation of Two Types p53 Recombinant Adenovirus and Quantitative Exogenous Expression of Green Fluorescence Protein by Flow Cytometry

二维码有效期 120s

摘要背景与目的 p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53 C-末端负调控序列的作用.本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot, FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)表达.方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明.三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达.结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53 C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失.Ad-(empty carrier)无p53.FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增.801D包含了不同荧光强度比率的细胞.结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier).流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法.