自噬在眼镜蛇神经毒素诱导A549细胞死亡中的作用

Role of Autophagy on Cobrotoxin Induced Cell Death of A549

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摘要背景与目的已有的研究表明眼镜蛇神经毒素具有抗肿瘤作用,而其在肺癌中的作用罕有研究.本研究观察cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞株的抗肿瘤作用,探讨自噬和P38-MAPK通路在这过程中的作用.方法应用MTT法观察cobrotoxin对A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制作用以及用3-MA抑制自噬、SB203580抑制P38-MAPK通路后cobrotoxin对A549细胞的生长抑制作用；应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响；蛋白免疫印迹法(Western blot)测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA抑制自噬和SB203580抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平.结果不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长有明显抑制作用,对HFL1人肺成纤维细胞无明显抑制作用,3-MA、SB203580作用后cobrotoxin对A549细胞的抑制作用降低；不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成；cobrotoxin作用后beclin-1、pP38蛋白表达水平明显提高,P62表达明显降低,Ⅱ型/Ⅰ型LC3比值增大,并有浓度依赖性,3-MA抑制自噬后beclin-1蛋白表达水平降低,P62表达增高、Ⅱ型/Ⅰ型LC3比值减小,SB203580抑制P38-MAPK通路后beclin-1、pP38蛋白表达水平降低,Ⅱ型/Ⅰ型LC3比值减小.结论 cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞体外生长有抑制作用,可能通过活化P38-MAPK通路激活自噬参与抗肿瘤过程.

作者申健 ^[1] 何靖康 ^[1] 唐兴 ^[1] 韩蓉 ^[2] 李睿 ^[1] 徐澄澄 ^[1] 吴亚娟 ^[1] 学术成果认领

作者单位苏州大学附属第一医院,苏州,215000 ^[1] 苏州大学药学院,苏州,215123 ^[2]

关键词眼镜蛇神经毒素人肺A549腺癌细胞自噬 P38-MAPK Cobrotoxin Anti-tumor Autophagy P38-MARK

主题词自噬(Autophagy)细胞(Cells)眼镜蛇神经毒素蛋白质类(Cobra Neurotoxin Proteins)人(Persons)肺(Lung)

栏目名称 基础研究

DOI 10.3779/j.issn.1009-3419.2013.07.02

发布时间 2013-10-10

基金项目

This study was supported by the grant from Key Medical Personnel Funded Project of Jiangsu Province (to Jingkang HE) (No.RC2011112).本研究受江苏省医学重点人才资助项目