化学联合方法对小鼠卵母细胞孤雌激活的实验研究

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摘要目的: 探讨较为优化的小鼠卵母细胞孤雌激活方法,为小鼠孤雌激活研究、胚胎克隆和核移植重构胚激活提供较规范的实验方法与数据.方法: 采用单个化学激活剂(乙醇、氯化锶、钙离子霉素)分别与细胞松弛素B联合的实验方法对CD-1(R)小鼠卵母细胞孤雌激活作用进行研究,并对所形成的胚胎进行进一步的培养、形态学观察和分析.结果: :乙醇组激活5 min较7 min、10 min的囊胚形成率、囊胚孵出率有显著差异(P＜0.05);氯化锶组激活30 min较1 h、2 h的囊胚形成率、囊胚孵出率有显著差异(P＜0.05);钙离子霉素组激活3 min较5 min、7 min的囊胚形成率、囊胚孵出率有显著差异(P＜0.05);3组间比较,乙醇组较其它两组的卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率方面均有显著差异(P＜0.05).联合激活中,两种物质同时激活较先后激活有显著差异(P＜0.05).经H-E染色,激活胚胎的卵裂球细胞核呈蓝紫色、胞质呈粉色,与正常授精的胚胎卵裂球形态相同.结论: [1]乙醇与细胞松弛素B联合激活法对小鼠卵母细胞行孤雌激活5 min在卵裂率、囊胚形成率、囊胚孵出率等方面均有明显优势.[2]联合激活方法比单纯激活剂激活率高,联合激活中,两种激活剂同时应用较先后应用激活效果好,并且实验方法简单、激活时间缩短,减少非激活因素对卵母细胞的影响.3从一般形态观察,提示激活胚胎形态和发育均较正常,乙醇组激活的胚胎可能更具有后续发育潜能,这是激活目的重要所在.