多重降落 PCR 检测血流感染产 ESBLs 肠杆菌科细菌与 MRSA 方法的建立和应用

Establishment and application of multiplex touchdown PCR for detection of extended-spectrum β-lactamases-producing Enterobacteriaceae and me-thicillin-resistant Staphylococcus aureus in bloodstream infection

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摘要目的：探索一种可同时检测产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的肠杆菌科细菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的多重降落 PCR 方法。方法收集某院20l3年3月—2014年9月102份住院患者血培养阳性标本，针对产 ESBLs 肠杆菌科细菌的 SHV、TEM、OXA 基因和 MRSA 的 MecA 基因设计4对特异性引物，分别采用单一降落 PCR 和多重降落 PCR 对各耐药基因进行扩增，并将结果与药敏纸片法进行比较。结果各单一 PCR 均可扩增出特异性条带，并用多重降落 PCR 同时检测了4种耐药基因；建立的多重降落 PCR 对4种耐药基因（MecA、SHV、TEM、OXA）DNA 的检测下限分别为4．37、2．19、4．53和3．59 ng。与药敏纸片法相比，多重降落PCR 总灵敏度与特异性分别为100．00％、88．24％，检测 ESBLs 的灵敏度达100．00％，特异性为87．23％，检测MRSA 的灵敏度和特异度均为100．00％。结论该实验建立的多重降落 PCR 具有高灵敏度与特异性，可用于产ESBLs 肠杆菌科细菌和 MRSA 所致血流感染的快速诊断与流行病学调查，有利于指导临床使用抗菌药物。