换一批LMP-1基因慢病毒重组体对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖影响及其表达
Effects of recombinant gene lentivirus containing LIM mineralization protein-1 on proliferation effect and expression of bone marrow mesenchymal stem cells in rats
摘要目的:探讨LMP-1重组慢病毒载体体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)的方法,并检测LMP-1基因对BMSC增殖能力的影响及表达.方法:选取清洁级4周龄SD大鼠6只(雌雄不限),无菌条件下提取骨髓间充质干细胞并培养至第3代,设立空白对照组(未经特殊处理,只有第3代骨髓间充质干细胞)、慢病毒载体转染组(在未经特殊处理的第3代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-GFP及转染试剂Polybrene)和重组基因转染组(在未经特殊处理的第3代骨髓间充质干细胞中加入PGC-FU-LMP-1-GFP及转染试剂Polybrene)进行转染.转染48 h后,通过免疫荧光显微镜观察荧光表达,流式细胞仪检测慢病毒的转染效率,采用MTT法评价慢病毒转染对BMSC增殖的影响;Western Blot检测转染后基因的表达情况.结果:①成功培养出第3代SD大鼠BMSC,以100的感染复数(MOI)转染,48 h后免疫荧光显微镜下可见大量绿色荧光蛋白表达,转染效率达67％;②不同时间点慢病毒载体转染组和重组基因转染组,与空白对照组细胞增殖比较差异无统计学意义;③Western Blot检测示重组基因转染组72 kDa处有条特征带,其大小与LMP-1融合蛋白(～50kDa+28kDa=78kDa)基本吻合.结论:经LMP-1基因慢病毒重组体转染大鼠骨髓间充质干细胞对其增殖活力没有影响并可有效表达LMP-1.
更多相关知识
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1003-0034.2013.12.012
发布时间
2014-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山西省自然科学基金资助项目（2010011050-2）；
Natural Science Foundation of Shanxi Province（2010011050-2）
- 浏览174
- 被引8
- 下载29
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
