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纳米纤维支架表面共培养HUVECs对人和大鼠MSCs成骨/血管分化的影响研究

The osteogenesis and angiogenesis study of human and rat MSCs co-cultured with HUVECs on nanofibrous scaffolds

摘要目的 研究在纳米纤维表面共培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)对人和大鼠骨髓间充质干细胞(human and rat bone marrow mesenchymal stem cells, hMSCs and rMSCs)向成骨/成血管分化的影响,为骨组织工程血管化及骨快速修复提供方法.方法 将聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA]静电纺丝纳米纤维进行氨气等离子体处理来接枝氨基基团,用扫描电子显微镜(scanning electronic microscopy, SEM)观察处理前后纤维形貌变化及直径分布;将HUVECs与hMSCs和rMSCs共培养(hMIX, rMIX)于修饰前后的PLGA纳米纤维表面,在培养1, 3 (4), 7 d后用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)检测细胞增殖,培养14 d后CD31免疫荧光染色检测成血管分化情况,培养21 d后茜素红S (alizarin red S,ARS)染色钙结节检测成骨分化情况.结果 SEM形貌观察结果显示经氨气等离子体处理后PLGA纳米纤维的直径及粗糙度略有增加;CCK-8结果显示氨基修饰后的纳米纤维表面更有利于rMIX的黏附和增殖,而对于hMIX的黏附和增殖影响很小;ARS染色结果显示氨基修饰的表面可以促进rMSCs成骨分化,而对hMSCs影响不大;CD31染色结果显示,HUVECs共培养及氨基修饰纳米纤维可以促进hMSCs成血管分化,而对rMSCs成血管分化没有促进作用.结论 氨基修饰的纳米纤维表面培养hMSCs-HUVECs可以有效促进组织工程骨血管化,在骨组织工程中有一定的应用前景.

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