人工诱导耐恩氟沙星金黄色葡萄球菌grlA和gyrA基因突变研究
Study on gyrA and grlA genes in stepwise-selected enrofloxcin-resistant mutants of Staphylococcus aureus
摘要通过恩氟沙星人工多步诱导标准金黄色葡萄球菌28001产生MIC值为4~≥128μg/ml的耐药变异株,选其3株提取染色体DNA,对gyrA和grlA基因进行PCR扩增,产物与pMD18-T载体连接,转化至JM109大肠埃希氏菌感受态细胞,筛选阳性克隆,测序.序列分析结果表明,低水平(MIC≤16μg/m1)的耐药突变株只发生grlA Ser80(TCC)→Phe(TGC)或grlA,Ser80(TCC)→Tyr(TAC)点突变,高水平(MIC≥128μg/ml)的耐药突变株需要grlA Ser80(TCC)→Phe(TGC)和gyrA Ser84(TCA)→Leu(TTA)等两个位点的突变.三株耐药株均发生grlA Ser80→Tyr(Phe)点突变,说明恩氟沙星作用于金黄色葡萄球菌的首要靶酶是拓扑异构酶Ⅳ.
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