换一批鲍曼不动杆菌基因点突变与耐药性及生物膜特征的相关性研究
Correlation study between gene point mutation of Acinetobacter baumannii and drug resistance and biofilm characteristics
摘要目的 研究鲍曼不动杆菌基因组上3个基因ptkD569N,shlBR403H及iclRY49H分别与基因pmrAI13M双位点突变,对鲍曼不动杆菌的耐药性和生物膜形成的影响.方法 在突变菌株AT196011的基础上,通过同源重组,构建3株双突变菌株AT196012、AT196013和AT196014;通过生长曲线考察不同点突变对细菌生长的影响;采用微量肉汤稀释法测定突变菌株对多黏菌素的最低抑菌浓度;通过时间-杀菌曲线动态分析,比较各突变菌株对多黏菌素的耐药性差异;采用结晶紫染色法对生物膜进行半定量测定,并用CCK-8试剂对生物膜内活菌数进行相对定量测定.结果 对PCR产物进行电泳检测与测序表明三株双突变菌株构建成功.各突变菌株对多黏菌素的最低抑菌浓度和时间-杀菌曲线表明,相较于AT196011单突变菌株,双突变株AT196012和AT196014对多黏菌素的耐药性增强,而AT196013的耐药性无明显变化;在生物膜形成方面,3株双突变菌株的生物膜生成量显著高于AT196011单突变菌株;1/2MIC浓度的多黏菌素对AT196013与AT196014双突变菌株生物膜形成的抑制作用显著低于AT196011单突变菌株,其生物膜内活菌量也显著多于AT196011单突变菌株.结论 基因ptkD569N、iclRY49H和基因pmrA113M的双点突变,会增加鲍曼不动杆菌对多黏菌素的耐药性;基因ptkD569N,shlBR403H和iclRY49H和pmrAI13M的双点突变,会协同促进生物膜的形成,且shlBR403H和iclRY49H的促进作用更强,相应双突变菌株对多黏菌素的耐受性更强.
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