换一批摘要利用定点突变及DNA重组技术,构建了在尿激酶原K区C-端的β-发夹区插入了精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(RGDS)片段的尿激酶原嵌合体基因,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Sf9细胞对嵌合体尿激酶原进行了高效表达. 用尿激酶原单抗亲和柱纯化表达产物,获得初步纯化的嵌合体蛋白. 对嵌合体蛋白进行血小板膜结合实验表明,此嵌合体具有依赖于钙离子的结合活化血小板膜的活性. 用生色底物ChromozymU测定嵌合体的酰胺解活性,结果显示,纤溶酶激活后的嵌合体比活为62 000 IU/mg,与文献报道的纤溶酶激活的尿激酶原比活65 355 IU/mg相近. 纤溶酶激活后的嵌合体激活纤溶酶原的反应符合米氏方程,其Km值为0.97 μmol/L,与天然尿激酶的Km值1.64 μmol/L相近. 嵌合体还显示了较强的体外抑制血小板聚集活性. 这些结果表明,此尿激酶原-RGDS嵌合体有可能成为一种新的双功能溶栓药物.
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