摘要目的:通过经典单克隆抗体制备技术制备氨基端前B型钠尿肽( NT-proBNP)单克隆抗体,将单克隆抗体进行特异性和亲和力鉴定,并用于免疫学检测试剂盒的开发。方法用带His-Trx-标签蛋白的NT-proBNP免疫Balb/C小鼠制备单克隆抗体。使用PEG1500化学融合法将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用不带标签的NT-proBNP对获取的杂交瘤细胞进行反复多次克隆筛选,将稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株经腹腔注射Balb/C小鼠诱导产生腹水,经蛋白G亲和纯化后获得NT-proBNP单克隆抗体并对其进行亲和力和特异性进行鉴定。结果成功进行细胞融合并获得4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体分泌亚型为IgG1,可特异性识别 NT-proBNP。经腹腔体内诱生法和蛋白 G 亲和纯化,获得高质量NT-proBNP单克隆抗体,经ELISA检测抗体效价在1∶105以上。结论通过传统经典单克隆抗体制备技术成功制备 NT-proBNP单克隆抗体,为NT-proBNP检测试剂盒的研发奠定了基础。
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