换一批SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因过表达对钙调蛋白表达的影响
Effect of over-expression of α7 neural nicotinic receptor gene on the expression of CaM protein in SH-SY5Y cells
摘要目的 构建稳定的α7神经型尼古丁受体(α7 nAChR)过表达的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,研究α7 nAChR过表达对钙调蛋白(CaM)表达水平的影响.方法 设计α7 nAChR引物并扩增α7 nAChR 特异性编码的核苷酸序列,退火后克隆至pcDNA 3.1 质粒,构建α7 nAChR-pcDNA 3.1重组质粒.将α7 nAChR-pcDNA 3.1重组质粒转染SH-SY5Y细胞,用含G418的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量(Real-time)PCR和蛋白质印迹方法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA 及蛋白表达水平的变化,蛋白质印迹方法检测CaM表达水平的变化.结果 构建的α7 nAChR mRNA过表达质粒成功转入SH-SY5Y细胞后,经G418筛选获得稳定转染细胞克隆株,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达量分别增加了533％和110％,CaM表达量增加了43％.结论 成功构建了α7 nAChR mRNA过表达的SH-SY5Y细胞株,α7 nAChR表达上调增加了CaM表达水平,这可能与阿尔茨海默病的发病有一定的关系.
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分类号
R749.01
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-9202.2017.06.003
发布时间
2017-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金资助项目（81360178）；
教育部"长江学者和创新团队发展计划资助"（IRT13058）；
贵州省科技厅重大专项（黔科合重大专项字2014〔6008〕）；
贵州省科技厅项目（201344,黔科合SY字〔2013〕3020）
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