miR-1247-3p靶向SFTPC基因对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

EFFECTS OF MIR-1247-3P TARGETING SFTPC GENE ON LPS-INDUCED ALVEOLAR EPITHELIAL CELL INJURY

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摘要目的探究微小RNA-1247-3p(miR-1247-3p)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞增殖、凋亡的影响.方法将人肺泡上皮A549细胞分为对照组(常规培养),LPS 5 mg/L、LPS 10 mg/L和LPS 15 mg/L组(5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L LPS诱导24 h),荧光定量PCR(qPCR)检测miR-1247-3p的表达量;后续将对数期A549细胞随机分为对照组(常规培养),LPS组(15 mg/L LPS),anti-NC+LPS组(转染敲低miR-1247-3p 的阴性对照+15 mg/L LPS),anti-miR-1247-3p+LPS 组(转染anti-miR-1247-3p 从而敲低miR-1247-3p+15 mg/L LPS),miR-NC 组(转染过表达miR-1247-3p 的阴性对照),miR-1247-3p 组(转染miR-1247-3p 模拟物从而过表达miR-1247-3p),anti-NC 组(转染敲低miR-1247-3p 的阴性对照),anti-miR-1247-3p组(转染anti-miR-1247-3p从而敲低miR-1247-3p),NC+LPS组[转染过表达肺表面活性蛋白C(SFTPC)的阴性对照+15 mg/L LPS)],SFTPC+LPS组(转染pcDNA-SFTPC从而过表达SFTPC+15 mg/L LPS),SFTPC+miR-NC+LPS组(共转染miR-1247-3p模拟物阴性对照和pcDNA-SFTPC+15 mg/L LPS),SFT-PC+miR-1247-3p+LPS 组(共转染pcDNA-SFTPC 和miR-1247-3p 模拟物+15 mg/L LPS),LPS 诱导A549细胞时间均为24 h;采用噻唑蓝(MTT)观察细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率;在线数据库预测和双荧光素酶报告基因验证miR-1247-3p与SFTPC的靶向关系;上调或下调miR-1247-3p观察SP-C蛋白的表达水平;共转染过表达SFTPC和miR-1247-3p观察对SP-C蛋白、细胞增殖和凋亡的影响.结果与对照组比较,LPS 5 mg/L、10 mg/L和LPS 15 mg/L组A549细胞中miR-1247-3p的表达量上调,具有一定浓度依赖性;与对照组比较,LPS组A549细胞的增殖显著减少,A549细胞的凋亡率明显增加;与anti-NC+LPS组比较,anti-miR-1247-3p+LPS组细胞中miR-1247-3p的表达量、凋亡率降低,细胞增殖显著提高;SFTPC是miR-1247-3p的靶基因;miR-1247-3p组较miR-NC组降低细胞中SP-C蛋白相对表达量;anti-miR-1247-3p组比anti-NC组提高SP-C蛋白相对表达量;与NC+LPS组比较,SFTPC+LPS组SP-C蛋白相对表达量、细胞增殖显著增加,细胞凋亡率显著减少;与SFTPC+miR-NC+LPS组比较,SFTPC+miR-1247-3p+LPS组细胞中SP-C蛋白相对表达量、细胞增殖降低,凋亡率升高.结论 miR-1247-3p通过抑制SFTPC调控LPS诱导的A549细胞生物学特性.