换一批肺炎链球菌假想蛋白SPD0414的表达纯化及保守性分析
Expression and purification of putative protein SPD0414 from Streptococcus pneumoniae and analysis of its conservation
摘要目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性.方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化重组蛋白.用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白特异性及纯度.通过纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备其多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在6种常见肺炎链球菌分离株的保守性.结果:克隆的SPD0414序列与Gene Bank中的数据相符,并实现了重组SPD0414蛋白高水平的可溶表达纯化蛋白免疫BALB/c小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western blot验证SPD0414蛋白在6株常见肺炎链球菌菌株中均有表达.结论:成功制备了高滴度、高特异性的SPD0414多克隆抗体,证实了SPD0414在肺炎链球菌不同菌株间保守性较高,为肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础.
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医学主题词
蛋白(Egg White)肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)性(Sex)抗体(Antibodies)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)
分类号
R392.1（医学免疫学）
DOI
10.3969/j.issn.1000-484X.2010.09.014
发布时间
2010-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
重庆市自然科学基金重点项目（(CSTC,2008BA7027)）
重庆市科委自然科学基金（(CSTC,2009BB5397)）
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