换一批家蝇Cecropin基因的原核表达及表达产物的免疫学鉴定
The prokaryotic expression of cecropin A gene in Musca demestica and immunological identification of its expressed products
摘要目的 克隆家蝇抗菌肽基因Cecropin A,进行原核表达,制备兔抗家蝇幼虫血清鉴定表达产物.方法 在GenBank中检索家蝇Cecropin A基因序列, 设计特异性引物, 从家蝇幼虫组织总RNA中RT-PCR扩增Cecropin A成熟肽(Mature Cecropin,MC)基因, 克隆入原核表达载体pET32a中,并转化大肠埃希菌BL21 (DE3).经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白.用家蝇幼虫匀浆液免疫家兔,获得多抗血清,双向琼脂扩散实验鉴定多克隆抗血清的效价.Western blotting 鉴定纯化后的重组蛋白质.结果 重组蛋白质Thioredoxin(硫氧还蛋白,Trx)-MC,经兔抗家蝇幼虫血清鉴定正确.结论 天然MC在原核表达系统中得到正确表达.
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分类号
R384.2（医学寄生虫学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1002-2694.2009.05.010
发布时间
2009-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（(3072198)）
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