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鲫TLR9基因克隆及生殖因素对其在肠道表达的影响

Molecular cloning of TLR9 gene in crucian carp (Carassius auratus L.) and evaluation of the influence of reproductive maturity on its expres-sion in gut

摘要为揭示 Toll 样受体家族基因 TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为 Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进行了分析。结果表明, CaTLR9 cDNA全长3509 bp,包含3195 bp的开放阅读框(ORF)、72 bp的5′非编码区和242 bp的3′非编码区。ORF编码1064个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白包含19个氨基酸组成的信号肽,15个富含亮氨酸的重复结构域(LRR),1个跨膜区和1个TIR结构域。系统进化分析表明, CaTLR9与其他鲤科鱼类同源性较高,与鲤(Cyprinus carpio)相似度为92%,其次是草鱼(Ctenopharyngodon idella)和斑马鱼(Danio rerio),分别为83%和79%。实时荧光定量PCR结果表明, CaTLR9在鲫脾中表达量最高,其次为肾和鳃,其他组织的表达量均较低。鲫肠道 TLR9在非繁殖期的表达水平明显低于繁殖期,注射适当剂量的外源 hCG 可显著上调鲫肠道TLR9的表达。本研究对揭示鲫非特异性免疫能力调节机制,提高鲫健康养殖水平具有一定参考价值。

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