换一批红藻源新型抗氧化剂己糖氧化酶的异源表达优化及酶学特性表征
Optimization of Heterologous Expression of Novel Antioxidant Hexose Oxidase from Red Alga and Its Enzymatic Properties
摘要天然抗氧化功能的活性多肽和食品酶具有绿色、安全及可靠的特点,广受欢迎.己糖氧化酶是一种底物谱广且具有除氧、酸化、提高蛋白交联等功能的氧化酶,可作为一种新型绿色多功能的食品添加剂.为了提高己糖氧化酶在毕赤酵母中的过量表达,系统比较不同基因型的宿主菌株、表达方式以及多拷贝数转化子等因素对己糖氧化酶异源表达的影响.应用新建立的 3 步筛选法获得不同基因型的转化子并比较其发酵酶活,结果表明,甲醇代谢缓慢的Muts型宿主有利于己糖氧化酶的表达;而甲醇诱导表达方式优于组成型表达方式;较高的己糖氧化酶基因拷贝数表达相对更高的酶活.然而,优化以上表达因素,己糖氧化酶表达水平仍不高,最高摇瓶发酵酶活为 4.92×10-2 U/mL.重组酶的纯化研究表明存在 3 种蛋白,分子质量分别为 62,40 ku和 29 ku,即己糖氧化酶的原酶和经蛋白酶切割而成的 2 个二聚体亚基,其中原酶的活性较低且占比最高,可能是表达活性偏低的原因之一.酶学特性研究表明,重组酶的最适条件为 50～60℃、pH 4.0,且常温条件(20℃)下可维持 50%的活性.低温条件(20～60℃)和酸性条件(pH 3.0～6.0),己糖氧化酶酶活较为稳定,说明其是一种耐酸性较好的抗氧化酶,适用于酸性食品的保鲜和抗氧化应用.
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DOI
10.16429/j.1009-7848.2023.08.005
发布时间
2023-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
浙江省重点研发计划项目（2019C02088）
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