换一批日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶的原核表达及纯化
Prokaryotic expression and purification of leucine aminopeptidase of Schistosoma japonicum
摘要目的 原核表达并纯化日本血吸虫亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase of Schistosomajaponicum,SjLAP).方法 从日本血吸虫成虫中RT-PCR扩增LAP基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,转化感受态E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达的重组曲LAP蛋白(rSjLAP)经SDS-PAGE和Western blot分析后,经His Binding Purification Kit 层析纯化,纯化的rSjLAP蛋白经SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度.结果 克隆的SjLAP基因与GenBank中登录的基因序列比较有2个碱基发生置换,导致对应的2个氨基酸发生置换,但均不在关键区域；重组表达质粒pET-28a/SjLAP经双酶切鉴定证实构建正确；表达的rSjLAP蛋白相对分子质量约45 000,诱导4h表达量最高；纯化的rSjLXP蛋白纯度较高,浓度达5.0 mg/ml,并可被抗小鼠His-tag单抗及血吸虫感染的患者血清和兔血清特异性识别,具有良好的反应原性.结论 成功在大肠杆菌中表达了rSjLAP蛋白,纯化的rSjLAP纯度较高,为血吸虫病的诊断和预防等研究奠定了基础.
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2013-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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