换一批H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用
DEVELOPMENT AND APPLICATION OF QUATITATIVE FLUORESCENT PCR ASSAY FOR DETECTION OF H9N2 SUBTYPE AVIAN INFLUENZA VIRUS
摘要H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）是我国主要流行的低致病性禽流感病毒亚型，因而对其进行病毒的监测与诊断显得极其重要。通过比对GenBank上H9亚型禽流感病毒HA基因序列,设计了一个特异性针对H9 AIV HA的探针。特异性和扩增曲线实验结果显示，该探针具有较好的扩增效率，且仅特异性识别H9亚型AIV。通过重组质粒pMD19-T-H9HA 10倍梯度稀释液为模板，进行荧光定量PCR。实验结果表明，本研究所建立的荧光定量PCR方法敏感性能达到100个DNA拷贝数，比传统PCR方法检测敏感性提高了1000倍。此外，本方法还能检测到10EID50个病毒，比传统PCR方法检测敏感性也提高了1000倍。通过批间和批内试验，结果表明，这两个试验的变异系数分别小于5%和1%，说明本研究的方法具有较好的重复性。此外，通过检测人工感染动物咽拭子，结果表明H9亚型AIV荧光定量PCR方法比传统PCR的方法检测敏感性提高了100倍。在临床样品的检测中，H9亚型AIV荧光定量PCR方法检测的阳性率比传统PCR法检测的阳性率提高了大约30%。综上所述，本研究所建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量PCR方法具有较高的特异性、准确性和敏感性，对H9亚型禽流感疫情防控及其流行病学调查具有积极的科学意义。
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分类号
S852.659.5
DOI
10.3969/j.issn.1674-6422.2013.02.002
发布时间
2013-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
公益性行业(农业)科研专项（201003012）
国家国际科技合作专项基金（2010DFB33920）
国家高技术研究发展计划（863计划）（2011AA10A200）
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（2013JB06）
科技攻关计划重点项目（12391902000）
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