换一批
换一批靶向血管生成素-2基因短发夹RNA真核表达载体的构建及内质网应激状态下对人脐静脉内皮细胞凋亡影响的观察
Construction of shRNA eukaryotic expression vectors targeting angiopoietin-2 gene and effects of angiopoietin-2 gene knockdown on apoptosis in endoplasmic reticulum stress-induced human umbilical vein endothelial cell
摘要目的：构建人血管生成素‐2（Ang‐2）短发夹RNA（shRNA）真核表达质粒，观察其在内质网应激（ERS）状态下对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖和凋亡的影响，探讨Ang‐2基因在 ERS状态下介导血管内皮细胞凋亡的作用和机制。方法采用DNA重组技术根据人Ang‐2 mRNA序列设计并合成2条shRNA寡核苷酸片段，构建表达质粒并通过脂质体介导转染 HUVECs ，对 Ang‐2基因进行RNA沉默，采用RT‐PCR和Western blot分别检测Ang‐2在ERS状态下mRNA及蛋白质的表达。结果经双酶切和测序鉴定证实，2个shRNA表达载体均构建成功。与空白对照、阴性对照组相比，Ang2‐1‐shRNA、Ang2‐2‐shRNA组HUVECs中Ang‐2基因mRNA及蛋白表达水平均降低，其中，Ang2‐1‐shR‐NA干扰效果最强。Ang‐2 mRNA和蛋白的抑制率分别达79.29％、68.21％。沉默 Ang‐2基因可增加ERS状态下HUVECs细胞活力及抑制其凋亡。结论成功构建靶向Ang‐2基因的shRNA真核表达载体，Ang‐2基因沉默对ERS状态下HUVECs凋亡有抑制作用。Ang‐2基因可抑制血管内皮细胞体外增殖，增强ERS状态下HUVECs凋亡。
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关键词
基因血管生成素-2内质网应激RNA干扰表达载体短发夹RNA细胞凋亡人脐静脉内皮细胞GeneAngiopoietin-2 ( Ang-2 )Endoplasmic reticulum stress ( ERS )RNA interferenceExpression vectorShort hairpin RNA (shRNA)ApoptosisHuman umbilical vein endothelial cells (HUVECs)
主题词
基因(Genes)血管(Blood Vessels)人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells)内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress)观察(Observation)
DOI
10.3969/j.issn.1006-6187.2015.02.015
发布时间
2015-03-25
基金项目
云南省教育厅科学研究基金项目
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