小干扰质粒干扰肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A对小鼠胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响
Effects of MafA gene interfered by siRNA on the proliferation of the pancreatic β-cells and the expression of insulin gene of the mouse
摘要目的 探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A (MafA)对胰岛β细胞增殖及胰岛素基因表达的影响. 方法 采用RT-PCR和Western blot分别测MafA mRNA 和蛋白的表达,筛选最佳小干扰质粒(siRNA),分为转染对照组(Cy3组)、阴性对照组(Scramble组)、阳性对照组(siβ-actin组)及实验组(即siMafA-1、siMafA-2和siMafA-3组).按不同葡萄糖浓度分为5.6 mmol/L、10 mmol/L、25 mmol/L.根据不同葡萄糖浓度是否加入siRNA分为未加siRNA的对照组:A0组5.6 mmol/L、B0组10 mmol/L、C0组25 mmol/L;加入siRNA的实验组:A1组5.6 mmol/L、B1组10 mmol/L、C1组25 mmol/L.测MafA基因沉默后MIN6细胞增殖、胰岛素(Insulin)-1和Insulin-2 mRNA表达、MafA蛋白表达及上清液胰岛素浓度的变化. 结果 siMafA-2组干扰效果最好.C1组MafA蛋白表达较C0组下降(P<0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度均降低(P<0.05).A1组与A0组比较,MafA蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);MIN6细胞增殖、Insulin-2 mRNA表达和上清液胰岛素浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05).不同糖浓度各亚组与对照组Insulin-1 mRNA表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05). 结论 siRNA-2组是理想的siRNA.MafA下调可抑制小鼠胰岛β细胞增殖.MafA下调可抑制小鼠Insulin2 mRNA表达和胰岛素分泌.
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