miR-27a通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ/葡萄糖转运蛋白4调控多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞功能的研究

miR-27a through PPARγ/GluT4 signal pathway regulates the function of ovarian granulosa cells in polycystic ovary syndrome

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摘要目的探讨PPARγ/GluT4 在颗粒细胞IR、细胞增殖和凋亡中的作用.方法选取2018 年 8 月至 2020 年 8 月于青海省人民医院生殖医学中心接受常规IVF-ET辅助生殖治疗的多囊卵巢综合征(PCOS)已婚患者 45 例,根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为IR组(PCOS-IR组,HOMA-IR≥2.57,n=23)和非IR组(PCOS-NIR组,HOMA-IR<2.57,n=22),另选取同期本院因男性或输卵管因素的已婚不孕患者为对照组(Con,n=21).miR-27a模拟物(miR-27a mimics)、miR-27a抑制剂(miR-27a inhibitor)和相应对照(mimics NC和inhibitor NC)转染PCOS-IR组颗粒细胞,分为miR-27a mimics组、miR-27a inhibitor组、mimics-NC组和inhibitor-NC组.双荧光素酶报告试验证实miR-27a与PPARγ结合.CCK-8 法和Annexinv-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡.定量实时PCR和Western blot法分别检测 miR-27a、GluT4、PPARγ、B 淋巴细胞瘤-2 相关 X(Bax)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤 2(Bcl-2)蛋白表达.结果与Con组比较,PCOS-NIR、PCOS-IR组miR-27a表达升高(P<0.01),PPARγ mRNA和蛋白表达降低(P<0.01).与PCOS-NIR组比较,PCOS-IR组miR-27a表达升高(P<0.05),PPARγ mRNA和蛋白表达降低(P<0.01).双荧光素酶报告显示,PPARγ和miR-27a之间有靶向结合位点.与inhibitor-NC组比较,miR-27a inhibitor组24、48、72 和 96h时细胞活性升高(P<0.05 或P<0.01),miR-27a inhibitor、mimics-NC组凋亡率降低(P<0.05或P<0.01),miR-27a mimics组凋亡率升高,48、72 和 96h时细胞活性降低(P<0.01).与miR-27a inhibitor 组比较,mimics-NC、miR-27a mimics 组凋亡率升高,24、48、72 和 96h 时细胞活性降低(P<0.05 或P<0.01).与inhibitor-NC组比较,miR-27a mimics组miR-27a、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),GluT4、PPARγ、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01),miR-27a inhibitor组GluT4、PPARγ、Bcl-2 蛋白表达表达升高(P<0.05 或P<0.01),miR-27a、Bax和Cleaved caspase-3 蛋白降低(P<0.01).与 miR-27a inhibitor 组比较,mimics-NC、miR-27a mimics 组 miR-27a、Bax 和Cleaved caspase-3 蛋白表达升高(P<0.01),GluT4、PPARγ、Bcl-2 蛋白表达降低(P<0.05 或P<0.01).结论 miR-27a表达与颗粒细胞IR,细胞增殖及细胞凋亡相关,其过程可能与PPARγ信号通路相关.