凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1通过糖原合成酶激酶-3β/信号转导和转录激活因子3通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1 regulates cardiac fibroblasts fibrosis induced by high glucose through glycogen synthase kinase-3β/signal transducer and activator of transcription 3 pathway

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摘要目的探讨凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体 1(LOX-1)通过糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化的相关机制.方法分离、培养及鉴定CFs,构建LOX-1 RNAi慢病毒载体(LV-LOX-1)及慢病毒空载体(LV-Con)并感染CFs.将细胞分为正常对照(NC)组、25 mmol/L葡萄糖的高糖(HG)组、高渗(HPG)组、LV-LOX-1 组和LV-Con组,LV-LOX-1 及LV-Con感染CFs后加入HG培养24 h,记为 HG+LV-LOX-1 组和 HG+LV-Con 组,分别使用 10 μmol/L SB216763 和 10 μmol/L STATTIC处理 HG+LV-LOX-1、HG+LV-Con 组 24 h,记为 HG+LV-LOX-1+SB216763 组、HG+LV-Con+SB216763 组、HG+LV-LOX-1+STATTIC 组和 HG+LV-Con+STATTIC 组.CCK-8 法检测CFs 活力,qRT-PCR 和Western blot 法检测LOX-1、I 型胶原(COL-I)、硫氧还蛋白5(TXNDC5)、GSK-3β、STAT3、p-GSK-3β、p-STAT3 mRNA和蛋白表达.结果获得LV-LOX-1感染的CFs,荧光显微镜下呈绿色.与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1 组LOX-1、COL-I、TXNDC5 mRNA 表达降低(P<0.05).与 HG+LV-LOX-1 组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组COL-I、TXNDC5 mRNA表达降低(P<0.05).与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1 组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),LOX-1、p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05).与HG+LV-LOX-1 组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763 组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组p-STAT3、COL-I、TXNDC5 蛋白表达降低(P<0.05).结论 LOX-1、GSK-3β、STAT3、TXNDC5、COL-I参与高糖诱导的CFs纤维化,LOX-1 通过GSK-3β/STAT3 通路促进TXNDC5 和COL-I表达,抑制LOX-1 可抑制高糖诱导的CFs纤维化.