换一批
换一批含HSV-TK基因的真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达
Construction of eukaryotic expression plasmid carrying HSV-TK gene and its expression in HepG2 cells
摘要目的构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV-TK 真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗.方法采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断,插入pcDNA3.1-LUC质粒的Bgl II位点,从而构建重组表达质粒pAFP-LUC.HSV-TK cDNA 全长序列替换pAFP-LUC质粒中EcoRI位点的Luciferase cDNA全序列构建重组表达质粒pAFP-TK.质粒pAFP-LUC采用脂质体法转染AFP阳性的肝癌细胞系HepG2及AFP 阴性的非肝癌细胞系HeLa,用Luciferase分析试剂盒分析Luciferase的表达情况.结果 PCR扩增所得AFP增强子片段的长度和序列通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序得到证实.采用限制性内切酶酶切及PCR方法证实质粒pAFP-LUC中插入的AFP增强子大小、位置及方向均正确.酶切后凝胶电泳分析证实HSV-TK已成功地定向克隆入真核表达载体中.Luciferase报道基因的表达受AFP 增强子的调控,在AFP阳性肝癌细胞HepG2中高效表达,而在AFP阴性的HeLa细胞中表达很低,这种差异具有显著性,P＜0.05. 结论 AFP增强子CMV启动子调控的HSV-TK真核表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的特异性表达为肝细胞癌的靶向基因治疗提供了实验基础.
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关键词
肝细胞癌(HCC)单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因治疗丙氧鸟苷(GCV)Hepatocellular Carcinoma (HCC)Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase (HSV-TK)Gene therapyGanciclovir (GCV)
分类号
R735.7
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2003.22.002
发布时间
2004-01-02
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