鼠CD40配体cDNA真核表达载体的构建
Construction of recombined murine CD40 ligand cDNA eukaryotic expression vector
摘要目的构建鼠CD40配体(Mcd40)cDNA真核表达载体,为进一步研究打下基础.方法从鼠脾细胞中提取总RNA作为模板,用特异的引物和RT-PCR法扩增mCD40L cDNA.PCR产物T-A克隆了T载体构建中间重组体,NheI和EcoRI双酶切后,将Mcd40L cDNA定向插入真核表达载体pcDNA3.1多克隆位点中,构建成重组表达质粒,并用酶切分析、PCR扩增和序列测定进行了鉴定.结果mCD40L cDNA被正确地克隆到真核表达载体pcDNA3.1+中,测序结果同文献报道的序列一致.结论真核表达载体pcDNA3.1+-mCD40L的成功构建,为开展利用mCD40L基因治疗肿瘤的研究奠定了基础.
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