摘要目的构建含猿猴病毒40大T抗原基因(SV40T)的逆转录病毒永生化载体pLTSN,为肝细胞永生化奠定基础.方法以质粒pUC19-SV40T为模板,高保真PCR扩增SV40T,双粘端连接法将其克隆到pLXSN的EcoRⅠ和BamHⅠ位点之间,通过菌落PCR和酶切法筛选、鉴定阳性克隆并经测序验证.结果用菌落PCR和酶切法随机筛选的10个菌落中9个为阳性,阳性克隆经质粒DNA测序分析确证.结论成功构建了逆转录病毒永生化载体pLTSN.
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