换一批
换一批人低氧诱导因子1α腺病毒载体的构建及鉴定
Construction and identification of human hypoxia inducible factor-1α adenovirus vector
摘要目的构建人HIF1α腺病毒表达载体,研究人低氧诱导因子1α基因对冠心病的血管新生作用.方法采用分子克隆技术,从pcDNA3.1/V5-HisA-HIF1α质粒获得HIF1α cDNA,经pcDNA3.1(+)克隆到穿梭质粒pShuttle2,以PI-Sce I和I-Ceu I双酶切重组穿梭质粒,含有HIF1 α cDNA的表达盒通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-X Viral DNA连接,重组成pAdeno-HIF1α腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在HEK293细胞中包装成为重组Adeno-HIF1α腺病毒,并进行PCR鉴定及滴度测定.结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,包装后冻融细胞的上清PCR检测重组腺病毒包装成功,病毒滴度为2×10pfu/mL.结论成功构建重组腺病毒Adeno-HIF1 α,为冠心病的基因治疗研究奠定基础.
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