抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗影响的研究

Radiation sensitizing effect of anti-HPV16E6-ribozyme on cervical carcinoma cell line

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摘要目的人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈癌最主要的致病因素,E6是主要的致癌基因之一,高危HPV基因型,如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件;放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法;该研究旨在探讨抗HPV16E6核酶(ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响.方法以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞.点杂交交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测3种细胞中E6基因的表达.用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达.结果点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi-P、CaSKi中明显降低.CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢(P＜0.01);CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi-p、CaSKi明显增加,克隆形成率明显下降(P＜0.05),CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较X射线照射后CaSKi-P、CaSKi明显增加(P＜0.01);CaSKi-R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi-P、CaSKi明显升高,bcl-2明显减少(P＜0.01).结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,且对放射治疗的敏感性增加.