换一批
换一批应用膜反向斑点杂交技术检测耐异烟肼结核分支杆菌基因型
Rapid detection of mycobacterium tuberculosis isoniazid-resistant genes by membrane reverse dot blot hybridization
摘要目的 应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对异烟肼(INH)耐药性.方法 设计与合成用于检测结核分支杆菌耐INH kat、inhA基因的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交.结果 20株INH敏感株中,仅9例出现野生型探针K1阳性杂交,余11株中,10株K1b'杂交阳性,PCR-DS显示KatG基因315位密码子AGC→ACC,1株K1c'杂交阳性,PCR-DS显示KatG基因315位密码子AGC→ACC;15株出现野生型探针inh1阳性杂交,另5株Inhal探针杂交阳性,PCR-DS显示inhA基因-15位C→T突变.36株耐药株中,17株K1探针杂交阳性,18株K1b'杂交阳性,1株与所试探针不杂交,PCR-DS显示KatG基因279位密码子GGC→GAC;11株与突变型Inhal探针阳性杂交,25株野生型探针inhl杂交阳性.KatG基因膜杂交突变检出率为50%,inhA基因膜杂交突变检出率为30.56%.结论 膜反向斑点杂交技术可成为检测部分结核分支杆菌耐异烟肼基因型简便、快速的方法.
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