换一批表达人幽门螺杆菌外膜蛋白的穿梭质粒的构建及在耻垢分枝杆菌中的表达
Recombination of Helicobacter pylori (Hp) OMP Escherichia coli-Mycobacteria Shuttle plasmids and its expression in Mycobacterium smegmatis mc2 155
摘要目的 建立表达人幽门螺杆菌外膜蛋白重组耻垢分枝杆菌疫苗株,为进一步应用重组耻垢分枝杆菌疫苗防治幽门螺杆菌感染打下基础.方法 利用聚合酶链反应(Polymerase chain teaction,PCR)扩增的幽门螺杆菌的外膜蛋白528编码基因全长片段,克隆入pET32a(+),鉴定无误后,再亚克隆入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒pLA71,构建pLA71-omp载体,将pLA71-omp电转化耻垢分枝杆菌,经卡那霉素筛选后,抽提质粒用PCR法鉴定,Westernblot检测omp的表达及活性.结果 从幽门螺杆菌基因组中扩增出约528 bp的基因片段.所构建重组体阳性克隆经酶切和PCR鉴定与预期结果一致,测序结果确证了插入片段的正确性,Western blot检测说明幽门螺杆菌的外膜蛋白528编码基因在分枝杆菌中获得了表达并具有良好的免疫原性.结论 成功构建了幽门螺杆菌外膜蛋白528编码基因大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒.该质粒能在E.coli/MS间进行穿梭,并在耻垢分枝杆菌中表达.
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主题词
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)质粒(Plasmids)耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)外膜(Adventitia)蛋白(Egg White)
分类号
Q784
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2006.20.003
发布时间
2006-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30371318）
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