人IκBαM真核表达载体的构建及其对大鼠肝移植缺血再灌注中ICAM-1的影响

Construction of human IκBα Mutant gene eukaryotic expression vectors and their effect on the expression of ICAM-1 in the ischmia-reperfusion injury of rat orthotopic liver transplantation

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摘要目的构建人IκBαM真核表达质粒,探讨人IκBαM对大鼠肝移植缺血再灌注中ICAM-1的影响.方法应用RT-PCR和重叠延伸pCR技术,得到点突变的人IκBαM,定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体.将SD大鼠原位肝移植模型分4组:组Ⅰ为假手术组(行游离肝脏手术),组Ⅱ为空白对照组(行大鼠原位肝移植手术),组Ⅲ为PcDNA3.0空载体转染组(移植前两天行人PcDNA3.0转染供肝),组Ⅳ为PcDNA3.0-IκBαM转染组(移植前两天行人PcDNA3.0-IκBαM转染供肝).分别于术后2 h、12 h、24 h和3 d取材.应用免疫组化、RT-PCR测定肝组织中ICAM-1的表达,同时检测各时点肝脏酶学的变化.结果经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;PcDNA3.0-IκBαM转染组与组Ⅱ、组Ⅲ相比:免疫组化示ICAM-1于移植后12 h、24 h的表达差异具有显著性;术后12 h ICAM-1mRNA的表达水平具有显著性差异;肝脏受损指标(ALT)在各时点差异具有显著性,尤其在术后12 h最为显著(P＜0.05).各移植组与Ⅰ组差异有显著性,(P＜0.05).结论真核表达质粒PcDNA3.0-IκBαM构建成功,IκBαM通过抑制ICAM-1的表达减轻大鼠肝移植缺血再灌注损伤.