换一批
换一批用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体
Generation of mouse anti-human organic anion transporter 3 polyclonal antibody by improved genetic immunization
摘要目的 用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)多克隆抗体.方法 提取人肾组织总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增hOAT3基因中免疫原性较强的细胞内素水序列片段,克隆到T-A克隆载体pCR2.1中构建pCR2.1-hOAT3载体,再从pCR2.1-hOAT3中用特异性内切酶Bcl Ⅰ和Xma Ⅰ切下hOAT3基因片段,亚克隆到载体pBQAP-TT中构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,酶切及序列分析鉴定正确后,用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fit3L同时免疫小鼠,12周后分离血清,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达.结果 成功扩增出228 bp的hOAT3细胞内亲水序列片段,构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,经酶切及序列分析鉴定正确.Western blot结果显示小鼠抗hOAT3多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白57 kD的hOAT3.免疫组化结果显示hOAT3定位表达在人近段肾小管上皮细胞基底侧细胞膜.结论 用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT3多克隆抗体.
更多相关知识
- 浏览301
- 被引0
- 下载2
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
