换一批
换一批摘要目的 研究腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP的构建及其在神经干细胞(NSCs)中的表达.方法 通过RT-PCR从大鼠海马中获得BDNF基因,通过基因克隆、HEK293包装,获得含增强绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF 2种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在.转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆.结果 荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF,72 h的含量达到最高值,为12.78 ng/mL;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂.结论 腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病奠定了基础.
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主题词
神经干细胞(Neural Stem Cells)基因(Genes)荧光(Fluorescence)蛋白(Egg White)脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor)
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2008.01.021
发布时间
2008-04-28
基金项目
上海市自然科学基金
上海铁路局科技发展基金
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