换一批
换一批鼻咽癌人源抗独特型基因工程抗体的原核表达及鉴定
Expression and identification of human anti-idiotypic single chain antibody of nasopharyngeal carcinoma in E.coli
摘要目的 构建鼻咽癌人源抗独特型单链抗体原核表达栽体,对其产物做初步鉴定,为鼻咽癌疫苗制备奠定基础.方法 采用分子克隆技术,PCR扩增G22ScFv基因,并将其克隆到原核表达载体pET25b(+)上,将重组子转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,表达的蛋白经His-tag纯化试剂盒纯化后复性.SDS-PAGE及Western blot分析融合蛋白.结果 构建的原核表达载体pET25b(+)-G22经测序检测,序列正确.在大肠杆菌中G22ScFv以包涵体形式获高效表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达的目的 蛋白Mr为25 kD,同时证实载体构建及表达均正确.目的 蛋白经试剂盒纯化后电泳分析纯度达95%以上.结论 利用基因重组技术,在原核细胞中表达出重组G22ScFv并得到纯化,为研究鼻咽癌疫苗打下了基础.
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