人乳头状瘤病毒16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系的建立

Immortalization of human laryngeal epithelial cells induced by DNA of type 16 human papillomavirus

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摘要目的建立人乳头状瘤病毒(HPV)16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系.确证HPV与喉癌的发生有无关系.方法采用脂质体介导法,将pSV HPV16 DNA导入原代培养的人喉上皮细胞,继续培养、传代,取20代细胞.用PCR检测细胞是否含有病毒的特异片段,用免疫组化染色检测E6、E7蛋白的表迭,用倒置显微镜、生长曲线、流式细胞仪、细胞角蛋白免疫组化染色、透射电镜及软琼脂克隆形成试验检测细胞的生物学特性.结果有3株细胞已连续培养传代超过20代,细胞含有HPV16 DNA的特异片段并有E6、E7蛋白的表达,细胞呈锚着依赖性、接触抑制性单层平铺生长.生长曲线呈典型的"S"型,细胞增殖指数为48％,所有细胞均表达角蛋白,胞浆含张力原纤维,软琼脂培养克隆形成试验阴性.结论成功建立了HPV16 DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系,为喉癌研究提供了新的理想模型,HPV16对人喉上皮有致癌作用,在喉癌组织标本中检测到的HPV16 DNA必定在其多步癌变过程中发挥了重要作用.

作者 KE Zhao-yang ^[1] 吴展元 ^[2] 学术成果认领

作者单位 Department of Otolaryngology, the Second Clinical College of Jinan University, Shenzhen People's Hospital,Shenzhen, Guangdong 518020, P.R.China ^[1] 武汉大学人民医院,耳鼻咽喉科,湖北,武汉,430060 ^[2]

关键词人乳头状瘤病毒16型人喉上皮永生化脂质体转染细胞培养 human papillomavirus16 human laryngeal epithelium immortalization liposomes transfection cell culture

主题词细胞(Cells)人(Persons)喉黏膜(Laryngeal Mucosa)病毒(Viruses)乳, 人(Milk, Human)

分类号 R737.33

栏目名称

论著

DOI 10.3969/j.issn.1005-8982.2008.14.002

发布时间 2008-09-24

基金项目

广东省医学科学技术研究基金（A2003694）