换一批
换一批幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因的克隆、表达及纯化
Construction urea channel protein (UreI) of human Helicobacter pylori and expression in E. coli
摘要目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的原核表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础.方法 从前期已构建好的融合表达质粒pET32a(+)/UreI中,酶切目的 基因UreI,并胶回收目的 基因片段,将目的 基因UreI与载体pQE3.0分别经HindIlI和KpnI双酶切、纯化、连接,转化并筛选含有目的 基因的重组质粒pQE30/UreI,并在E.coli BL21中表达,表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析.结果 经KpnI、HindIII双酶切后,小片段大小为585 bp,为插入的基因片段Hp UreI基因,经KpnI、NbaI双酶切,小片段为1 749 bp,与实验设计相一致.重组质粒pQE30/Urel经SDS-PAGE分析显示,在原核细胞中得到了高效表达,目的 蛋白分子量为21 kD左右,以包涵体形式表达.通过Quantity-one软件分析,其表达量约占菌体总蛋白的20%.经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达90%以上,Western blot分析显示,该目的 蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的免疫原性.结论 成功地克隆和构建了原核表达载体pQE30/UreI,并在原核细胞中得到了高效表达.
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