换一批
换一批SARS-CoV E、M和N蛋白克隆、表达及抗原性的研究
Cloning and expression of E, M and N protein of SARS-CoV in Escherichia coli and their antigenicities
摘要目的 获得大量SARS-CoV E、M和N重组蛋白,研究其抗原性.方法 应用基因工程技术构建pGEX4T-1/SARS-CoV E、M和N大肠杆茵工程茵,表达、纯化重组蛋白,通过Western blot分析其免疫反应性.结果 通过PCR扩增获得SARS-CoV E、M、N片断;以原核表达质粒pGEX4T-1为载体,构建了原核表达重组质粒pGEX4T-1/E、pGEX4T-1/M和pGEX4T-1/N.重组N蛋白在大肠杆菌系统中以可溶性形式大量表达,分子量约为71.97 kDa.Western blot分析证实,重组N蛋白可与pVAX1-N基因疫苗免疫的小鼠血清产生免疫反应.重组E蛋白和重组M蛋白表达量极低,分子量约为35kDa和46kDa. 结论成功地构建了SARS-CoV N大肠杆菌基因工程菌,能以可溶性形式高水平地表达重组N蛋白;该蛋白具有较好的免疫反应性和抗原特异性,可能成为SARS血清学诊断的候选抗原之一.
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DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2009.22.005
发布时间
2016-01-23
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