换一批
换一批摘要以低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)基因重组腺病毒体外转染胚胎大鼠神经干细胞,建立能稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞,为进一步的实验研究提供理论和物质基础.方法 ①分离SD大鼠胎鼠的间脑,加入神经生长因子EGF、bFGF和B27的神经干细胞务件培养基中克隆培养.通过检测神经干细胞的特异性抗原神经巢蛋白(nestin)、自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞;②用含有HIF-1α基因的腺病毒感染培养第2代的神经干细胞,通过绿色荧光蛋白的表达证明转染基因的表达,Western-blot检测转染后HIF-1α蛋白表达的变化,免疫原位杂交检测转染后HIF-1αmRNA 阳性细胞.结果 ①分离培养出了大量具有不断增殖能力的神经干细胞;②70%～80%的神经干细胞能感染HIF-1α基因重组腺病毒,Western-blot和免疫原位杂交实验显示HIF-1α蛋白大量表达.结论 成功建立了神经干细胞的分离培养方法及能长期稳定表达HIF-1α的基因工程化神经干细胞.
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