实时荧光定量RT-PCR检测肝卵圆细胞Alb和CK-19 mRNA的表达

Using real-time fluorescence quantitative RT-PCR to detect Alb and CK-19 mRNA in hepatic oval cells

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摘要目的建立Alb和CK-19 mRNA表达量检测的实时荧光定量聚合酶链式反应(KT-PCK)系统,检测Lewis大鼠肝卵圆细胞(HOC))及其分化细胞中Alb和CK-19 mRNA表达量并分析其意义.方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测分别检测HOC、分化细胞、胆道及肝脏标本中Alb和CK-19 mRNA的表达情况,以上标本各20例.结果 Alb mRNA在HOC(-1.820±0.614)中的表达水平明显低于其在肝脏(-1.139±0.588)中的表达水平(P<0.05);CK-19 mRNA在HOC(-3.852±0.974)中的表达水平明显低于在胆道(-1.739±0.704)、肝脏(-1.926±0.653)、分化细胞(-1.492±0.634)中的表达水平(P<0.05);HOC Alb mRNA表达水平高于CK-19 mRNA表达水平(P<0.05),分化细胞Alb mRNA(-1.758±0.543)表达水平同ck-19 mRNA表达水平差异不明显(P>0.05).结论使用实时荧光定量KT-PCK检测HOC Alb和CK-19 mKNA的表达克服了传统PCR只能定性不能定量的缺点,为研究Alb和CK-19 mRNA在HOC中的表达提供了相对定量的方法,成功地进行该项实验需要掌控好几个关键环节;HOC中Alb mRNA和CK-19 mRNA表达量低,经过诱导分化后两者表达量明显升高,证实HOC具有分化为肝细胞和胆管上皮细胞的双向分化特性,在本研究的诱导分化条件下HOC主要向胆管上皮细胞分化.