换一批内皮细胞特异性表达血管内皮生长因子基因载体的构建及表达特性验证
Construction of vector specifically expressed vascular endothelial growth factor gene in endothelial cells and research of its expressive character
摘要目的 构建在内皮细胞特异性表达人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的真核表达栽体,验证HRE.ppET-1调控元件的内皮细胞表达特异性.方法 用聚合酶链反应(PCR)方法直接合成缺氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE),人前内皮素原-1基因(human preproendothelin-1,ppET-1)启动子、VEGF元件,通过PCK、酶切、连接等一系列核酸分子操作,将各元件亚克隆至pcD-NA3.1载体上,最终组合而成真核表达栽体pcDNA3.1-VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-ppET-1+VEGF+Pa,pcDNA3.1(-CMV)-HRE+ppET-1+VEGF+Pa;脂质体转染离体培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)和肝细胞,荧光显微镜下观察GFP表达,验证HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中的特异性.结果 各载体经酶切鉴定和测序证实.GFP的表达显示HRE.ppET-1调控元件在内皮细胞中可有效转录外源基因,在非内皮细胞中表达极弱.结论 成功构建能在内皮细胞特异性表达人VEGF基因的真核表达栽体;HRE.ppET-1调控元件具有内皮细胞表达特异性,为进一步利用VEGF进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定良好基础.
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关键词
缺氧反应元件人前内皮素原-1基因启动子血管内皮生长因子内皮细胞hypoxia-responsive elementhuman preproendothelin-1 promotervascular endothelial growth factorendothelial cells
主题词
内皮细胞(Endothelial Cells)基因(Genes)血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A)敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)人(Persons)
分类号
Q782
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2010.21.002
发布时间
2011-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
the National Science Foundation of China（30772341）
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