换一批
换一批摘要目的 观察小干扰RNA(siKNA)对肾癌786-0细胞株G250基因表达的抑制效果,以建立稳定的RNA干扰(RNAi)技术及用于进一步对G250基因的研究.方法 体外合成4条针对G250基因的siRNA和1条阴性对照序列,并利用载体pRNAT-U6.1/Neo构建重组质粒.测序鉴定后,以脂质体介导转染人肾癌786-0细胞株;分别应用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹技术测定G250 mRNA和蛋白的表达情况.结果 DNA测序和酶切鉴定表明针对G250基因的siRNA表达载体构建成功.4条siRNA分别使G250mRNA的表达降低了35.56%、49.27%、45.88%和65.13%,G250蛋白的表达量也相应降低.结论 siRNA可有效抑制786-0细胞株中G250基因的表达,满足下一步实验的需要.
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