换一批
换一批Math1基因重组慢病毒的构建及其在293T细胞中的表达
Construct recombinant lentivirus vector with Math1 and the expression of Math1 in 293T cells
摘要目的 构建携带Math1基因的重组慢病毒载体,检测其滴度,检测其在293T细胞中的表达.方法 PCR扩增Math1基因,将其连入慢病毒栽体pLenti-GFP中;在感受态细胞DH5α中培养扩增,并行Math1基因的测序鉴定;将重组的慢病毒四质粒共转染293T细胞,收获并浓缩病毒;感染293T细胞和提取细胞DNA后用实时定量PCR法检测病毒滴度.用逆转录PCR和westem blot法检测Mathl基因在感染病毒的293T细胞中的表达.结果 构建的慢病毒载体pLenti-Math1-GFP经测序分析证实基因序列正确.四质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光.包装后慢病毒测定滴度约为3X10"Tu/L.逆转录PCR和Western blot法均能检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达.结论 成功构建携带Math1基因的重组慢病毒,并能在293T细胞中表达.
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分类号
R394.3
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2011.04.009
发布时间
2011-07-05
基金项目
国家自然科学基金课题
浙江省自然科学基金课题
浙江省医药卫生科学研究基金课题
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