换一批
换一批重组抗血小板多肽在Cos-7细胞中的表达、纯化和活性检测
The expression, purification and activity assay of recombinant anti-platelet peptides in Cos-7 cells
摘要目的 克隆并在Cos-7细胞中表达有活性的抗血小板多肽.方法 合成编码抗血小板多肽赖氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(KGD)的核苷酸序列并克隆于pCDNA3.1/myc-hisB载体,构建重组表达载体pcD -NA3.1-KGD.以lipofectamine 2000将重组表达载体转染Cos-7细胞,G418筛选抗性细胞克隆.裂解细胞并抽提胞内蛋白,采用融合表达的myc多肽表位抗体,通过Western blot检测目的蛋白的表达.大量扩增高表达KGD融合蛋白的抗性细胞克隆,ProBondTM系统纯化KGD融合蛋白.应用血小板凝聚仪和应用流式细胞仪测定KGD多肽抗血小板活性.结果 成功构建KGD表达载体pcDNA3.1-KGD,该载体转染Cos-7细胞经G418筛选获得5株抗性细胞克隆,Western blot显示其中2株细胞很好表达KGD融合蛋白.ProBond试剂纯化KGD融合蛋白,获得纯度为94.6％的融合蛋白.KGD均能通过占据GPⅡb/Ⅲa受体而抑制血小板聚集.结论 在Cos-7细胞中可大量表达并获得高纯度有活性的抗血小板多肽KGD融合蛋白.
更多相关知识
- 浏览133
- 被引1
- 下载1
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
