换一批人pcDNA3.1(+)-Cav-1真核表达载体的构建及鉴定
Construction and identification of Human pcDNA3.1(+)-Cav-1 eukaryotic expression vector
摘要目的 构建pcDNA3.1 (+)-Cav-1真核表达载体,建立稳定转染pcCav-1的6-10B细胞系(6-10B-Cav-1).方法 提取5-8F细胞总RNA,利用RT-PCR获取caveolin-1(Cav-1)开放读码框(Open reading frame,ORF)序列构建Cav- 1/TA亚克隆载体,再将双酶切后的目的片段连入pcDNA3.1(+)真核表达载体并转染6-10B细胞.结果 RT-PCR扩增Cav-1基因ORF序列在783 bp附近见目的条带；质粒酶切鉴定及菌落PCR鉴定分别在783 bp及346 bp附近见目的条带；转染6-10B细胞后,转染组与对照组相比,Cav-1在mRNA水平表达差异具有统计学意义(P =0.027),在蛋白质水平前者比后者高出2倍以上.结论 人Cav-1重组真核表达载体pcDNA3.1( +)-Cav-1构建成功并获得稳定表达Cav -1的6-10B细胞,为进一步检测C av -1在鼻咽癌转移过程的作用奠定基础.
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主题词
转染(Transfection)人(Persons)窖蛋白1(Caveolin 1)鼻咽肿瘤(Nasopharyngeal Neoplasms)肿瘤转移(Neoplasm Metastasis)
分类号
R-331
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2012.06.002
发布时间
2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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