换一批
换一批重组人KGF基因减毒沙门氏菌菌株的构建及鉴定
Construction and Identification of the KGF gene mediated by recombinant Attenuated Salmonella typhimurium
摘要目的 构建携带人角质细胞生长因子(KGF)基因真核表达载体的减毒沙门氏菌,并进行稳定性检测及体外表达鉴定,为探索制备针对高原急性肺损伤的细胞因子保护剂提供理论和实验依据.方法 采用RT-PCR法从正常人皮肤组织总RNA扩增出KGF cDNA全长,测序正确后将其定向插入到pcDNA3.0(+)质粒BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ之间;以电转化法将构建成功的质粒转化入减毒沙门氏菌Ty21a中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPK,并将其在卡那霉素(+)和卡那霉素(-)的LB培养板上分别传代培养40代,每隔10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定；TPK菌株转染A549细胞,转染24 h及48 h后以RT-PCR及ELISA法检测KGF基因及蛋白表达水平.结果 成功构建了携带KGF基因的重组减毒沙门氏菌TPK,其可稳定遗传,不因无选择性压力而使质粒丢失,并能在体外稳定表达KGF基因及蛋白.结论 携带KGF基因减毒沙门氏菌TPK的成功构建和体外稳定表达为进一步研究角质细胞因子KGF对肺损伤的保护作用提供了实验依据.
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主题词
基因(Genes)细胞(Cells)人(Persons)胞间信号肽类和蛋白质类(Intercellular Signaling Peptides and Proteins)肺损伤(Lung Injury)
分类号
R563
栏目名称
论著
发布时间
2016-01-23
基金项目
兰州军区卫生项目
兰州军区后勤科研项目
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