换一批
换一批Notch1胞内结构域真核表达质粒构建及在H9c2心肌样细胞的表达和生物学功能
Construction of eukaryotic expression plasmid for Notch1 intracellular domain and its expression and function in H9c2 cells
摘要目的 构建Notch 1胞内结构域(N1ICD)真核表达质粒,确定能在H9c2心肌样细胞内表达,并发挥生物学效应,为后续Notch1信号通路的研究提供实验依据.方法 设计并合成1对含有BamH Ⅰ和EcoR I酶切位点的特异性引物,以小鼠cDNA文库为模板,经PCR扩增得到了1 122 bp的目的片段,定向克隆至pcDNA 3.1/myc-His质粒,构建pcDNA3.1/N1ICD-myc-His真核表达质粒.通过双酶切及基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,48 h后提总蛋白,Western-blotting检测myc和Hes1,确定N1ICD能在H9c2细胞表达,并启动下游基因表达.结果 表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His双酶切及基因测序正确,N1ICD可在H9c2心肌样细胞内高效表达,具有Notch1生物学效应.结论 真核表达质粒pcDNA3.1/N1ICD-myc-His构建成功,为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础.
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关键词
Notch信号通路胞内结构域质粒构建H9c2心肌样细胞notch signaling pathwayintracellular domainplasmid constructionH9c2 cell
分类号
R-332
栏目名称
论著
发布时间
2016-01-23
基金项目
国家自然科学基金
江西省研究生创新专项资金
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