换一批
换一批人肝细胞生长因子受体启动子荧光素酶表达载体的构建及活性测定
Construction of luciferase expression vector containing C-MET and characterization of the promoter activity
摘要目的 构建含人肝细胞生长因子受体(C-MET)启动子-223 ～ +60区域的荧光素酶报告基因质粒,并测定其在卵巢癌细胞株中的活性.方法 应用PCR法扩增获得含有人C-MET基因启动子-223～+60区域的DNA片段,将其连接至荧光素酶质粒pGL3-Basic中,得到pGL3-C-MET-Promoter重组质粒;经限制性内切酶酶切及测序得以鉴定;将该质粒转染4株卵巢癌细胞,检测细胞中荧光素酶的活性.结果 双酶切及测序结果证实pGL3-C-MET-Promoter重组质粒插入片段序列正确,克隆的C-MET基因片段具有启动子活性,在卵巢癌细胞株OVCAR3细胞中的活性最高.结论 成功构建了pGL3-C-MET-Promoter报告基因重组质粒,为进一步研究C-MET对卵巢癌生物学行为的影响奠定了基础.
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