换一批
换一批Snail启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用
Construction and application of luciferase reporter gene vector containing Snailpromoter
摘要目的 构建Snail启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-Snail-luc并对其进行生物活性的鉴定及其初步的应用研究.方法 通过PCR技术从人血液基因组中钓出我们需要的具有启动子活性的Snail片段,双酶切后与双酶切的pGL3-Basic空载体连接成重组体pGL3-Basic-Snai1-luc,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切,测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体.结果 成功地构建了pGL3-Basic-Snai1-luc荧光素酶报告基因载体,并在CNE2细胞内鉴定了其在TGF-β1的诱导下,能启动荧光素酶的表达.此外,笔者通过Western blotting检测表明TGF-β1能显著性的诱导Snail蛋白的表达,充分证明了我们构建的pGL3-Basic-Snail-luc是具有生物学功能的.结论 具有生物活性的pGL3-Basic-Snai1-luc的构建成功为研究Snai1在EMT过程中的调控机制研究和以snail为靶标的抗肿瘤药物快速高通量的筛选提供了非常重要的研究工具.
更多相关知识
主题词
荧光素(Fluorescein)基因, 报告(Genes, Reporter)上皮细胞(Epithelial Cells)肿瘤转移(Neoplasm Metastasis)研究(Research)
分类号
R73-3
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1005-8982.2013.31.003
发布时间
2016-01-23
基金项目
湖南省自然科学基金
国家自然科学基金
国家“973”计划资助项目
- 浏览363
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
