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针对丝聚合蛋白基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建及筛选

Construction of RNA interference lentiviral vector with human FLG gene

摘要目的 构建丝聚合蛋白(FLG)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体.方法 设计针对人FLG基因的mRNA干扰靶序列,合成相应双链DNA,通过BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP载体连接产生shRNA载体,并与pHelper 1.0、pHelper 2.0两种载体共转染293T细胞培养,获得重组慢病毒载体后,转染目的细胞,实现针对FLG基因的RNA干扰.结果 经鉴定该实验的慢病毒载体,对人正常皮肤细胞HACAT干扰效果达75%~95%,以RNAi3的沉默效应最佳.结论 重组的慢病毒载体为有关FLG基因的进一步研究奠定良好实验基础,并能广泛用于体内基因治疗及基因功能研究.

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分类号 Q782
栏目名称 论著
DOI 10.3969/j.issn.1005-8982.2014.08.002
发布时间 2016-01-23
基金项目
国家自然科学基金
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